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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析

發(fā)布日期: 2010-10-19
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1. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基?
    視細(xì)胞生長(zhǎng)密度和生長(zhǎng)狀態(tài)而定,有的細(xì)胞消耗培養(yǎng)液較快,細(xì)胞有60-70%的匯合度就可以消化傳代,簡(jiǎn)單的換液不合適,因?yàn)榧?xì)胞有可能處于缺營(yíng)養(yǎng)的狀態(tài);另外一種需要換液情況就是細(xì)胞狀態(tài)欠佳的時(shí)候,可以用PBS先洗滌一下,再更換*培養(yǎng)液,去除那些死細(xì)胞和漂浮的狀態(tài)不好的細(xì)胞,可以調(diào)節(jié)一下細(xì)胞狀態(tài)。

2.
可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
   
不建議。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,而且經(jīng)過一定時(shí)間馴化,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞都有可能出現(xiàn)不適應(yīng),表現(xiàn)出生長(zhǎng)緩慢,顆粒增多,有死細(xì)胞出現(xiàn),造成細(xì)胞無法存活。也有些細(xì)胞在更換培養(yǎng)液后也能正常的生長(zhǎng),細(xì)胞狀態(tài)也能維持,但是問題往往出現(xiàn)在凍存后期的復(fù)蘇過程,有可能細(xì)胞沒法復(fù)蘇,所以不建議隨便更換培養(yǎng)基。
3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
    不建議。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。按照道理胎牛血清比小牛血清要好,但是在實(shí)際操作中未必如此,更換好的血清細(xì)胞同樣會(huì)有可能出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)欠佳,另外就是,在細(xì)胞狀態(tài)欠佳的狀態(tài),更換好的血清有可能會(huì)適得其反,加速細(xì)胞死亡,所以不建議隨便更換血清。

4.
何謂FBS, FCS, CS, HS ?
    FBS (fetal bovine serum)
FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼,請(qǐng)不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

5.
細(xì)胞之接種密度為何?
   
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長(zhǎng)或狀態(tài)欠佳之重要原因。

6.
懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理?
   
一般情況下可以加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,但不可以持續(xù)這樣操作,因?yàn)榧?xì)胞的代謝物一直累積在培養(yǎng)液中,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),濃度越來越高,會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng),所以建議稀釋細(xì)胞濃度傳代幾次后要做一次離心處理,去除培養(yǎng)液中長(zhǎng)期累積的代謝物,這樣有利于保持細(xì)胞的狀態(tài)。

7.
冷凍管應(yīng)如何解凍?
   
取出冷凍管后,須立即放入37-40 °C 水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管之爆裂。

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