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血清的常見問題

發(fā)布日期: 2014-04-21
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血清是細胞培養(yǎng)中重要的元素之一。因此,上海科興特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題,供大家參考:

1、保存血清好的方法是什么?

上海公司建議血清應(yīng)保存在-5-2O。但是,若存放于4時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。反復(fù)凍融會對血清的品質(zhì)造成不良影響。

2、如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

上海公司建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于28冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?

由于GIBCO血清在過濾之前,沒有經(jīng)過預(yù)老化(pre-aged)處理,所以在解凍過程(包括沒有*解凍)或儲存在2-8時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等)可能會聚集成團,形成絮狀沉淀或外觀混濁;在運輸過程中,由于時間較長,所以往往有少許解凍,因此也可能稍有沉淀,但這些都不影響血清性能。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。

4、何謂熱滅活?

一般是以56,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細胞,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。

5、有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清,沉淀物的形成會顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

因此我們建議您,若非必須,您可以不做熱滅活處理血清。這樣,不僅節(jié)省您寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,才推薦做熱滅活。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇。

6、如何減少沉淀物的產(chǎn)生?

上??婆d建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:

解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-204 室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(-20 37),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生

請勿將血清置于37太久。若在37放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,則毋須做此步驟。

若必須做血清的熱滅活,請遵守5630分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

 

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