糖原磷酸化酶b（GPb）活性檢測試劑盒說明書
                                            微量法
貨號(hào)：BC3355
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入0.5 mL蒸餾水，充分混勻；

2. 試劑三：臨用前加入0.5mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；

3. 試劑四：臨用前加入1.25 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；

4. 試劑五：臨用前每支加入1 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；一支即可做100T，為延長試劑盒使用時(shí)間故多給一支。

5. 試劑六：臨用前每支加入1 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；一支即可做100T，為延長試劑盒使用時(shí)間故多給一支。

6. 試劑七：臨用前加入2 mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；

7. 工作液的配制：臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需用量，按照試劑一：試劑二：試劑三：試劑四 =148μL: 4μL: 4μL: 4μL（1T的量）的比例，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關(guān)鍵酶，催化糖原的磷酸化反應(yīng)。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶a（Glycogen phosphorylase a, GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b, GPb）兩種形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶a的催化下進(jìn)行。未添加激活劑時(shí)，糖原磷酸化酶a催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。添加激活劑測定GP（GPa和GPb）總活性，未添加激活劑時(shí)測定GPa活性，GP活性-GPa活性得到GPb活性。在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、研缽/勻漿器、電子天平、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

1. 如果測定吸光值ΔA＞0.6，建議稀釋樣本后再測定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果測定吸光值較低或接近空白OD值，建議增加樣本量后再進(jìn)行測定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱取0.1 g兔子肝臟組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，8000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。用石英比色皿按照測定步驟操作，計(jì)算ΔA_GPa=A2-A1=0.3472-0.2253=0.1219，ΔA_GP=A4-A3=0.4059-0.2274=0.1785,按公式計(jì)算活性：GPb（U/g 質(zhì)量）=321.54×(ΔA_GP-ΔA_GPa)÷W =321.54×(0.1785-0.1219)÷0.1 =181.99U/g 質(zhì)量

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