總糖含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC2710

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1．標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg無水*萄糖。臨用前加1 mL蒸餾水溶解為10 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品備用，2-8℃保存兩周。

產(chǎn)品說明：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)?？偺?/span>主要指具有還原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在測定條件下能水解為還原性的單糖的蔗糖，麥芽糖以及可能部分水解的淀粉。

總糖酸水解為還原糖，還原糖在堿性條件下與DNS試劑共熱后被還原成氨基化合物，在堿性溶液中呈紅棕色，還原糖的量與桔紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，以此測定樣本中的總糖含量。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.0444 mg/mL

線性范圍：0.1-1 mg/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織樣本的處理：稱取約0.1g樣本于10mLEP管中，加入1mL 試劑一，1.5mL蒸餾水，研磨勻漿，沸水浴30min，加入1mL試劑二，渦旋混勻，用蒸餾水定容至10mL，8000g，25℃離心10min，取上清液待測。（注意稀釋，見注意事項）。

2、血清（漿）、液體樣本的處理：取0.1mL血清（漿）于1mLEP管中，加入0.1mL 試劑一，0.15mL蒸餾水，勻漿，沸水浴30min，加入0.1mL試劑二，渦旋混勻，用蒸餾水定容至1mL，8000g，25℃離心10min，取上清液待測。（注意稀釋，見注意事項）。

二、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.5、0.2、0.1mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需150µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、加樣表：

渦旋混勻，在540nm下測定吸光值，分別記為A空白管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管。計算ΔA測定=A測定管-A空白管、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次。

三、總糖含量計算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。

2、按樣本質(zhì)量計算：總糖含量（mg/g 質(zhì)量）=（x×V樣總）÷W×稀釋倍數(shù)=10×x÷W×稀釋倍數(shù)

3、按血清（漿）、液體體積計算：總糖含量（mg/mL）=（x×V提）÷V樣×稀釋倍數(shù)=10×x×稀釋倍數(shù)

V樣總：樣本體積總體積，10mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提：液體或血清樣本總體積，1mL；V樣：液體或血清體積，0.1mL。

注意事項：

1、此試劑盒對于纖維素的分解程度無法達(dá)到100%。

2、如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1、 取0.1g兔子肝臟進(jìn)行樣本處理，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.965-0.019=0.946，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.2984x-0.0284，則x=0.7505，按樣本質(zhì)量計算含量得：

總糖含量（mg/g 質(zhì)量）=10×x÷W=75.05 mg/g 質(zhì)量。

2、 取0.1g迎春進(jìn)行樣本處理，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.961-0.019=0.942，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.2984x-0.0284，則x=0.7474，按樣本質(zhì)量計算含量得：

總糖含量（mg/g 質(zhì)量）=10×x÷W=74.74 mg/g 質(zhì)量。

3、 取小鼠血清進(jìn)行處理，取上清，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.459-0.019=0.440，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.2984x-0.0284，則x=0.3608，按血清體積計算含量得：

總糖含量（mg/mL）=10×x=3.608 mg/mL。

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